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話說PEG的那些事兒

更新時間:2019-11-12 瀏覽次數:3822

一開始知道聚乙二醇(PEG)這種物質,是源于大學本科課程《藥物制劑》,從書中了解到PEG是以多種角色參與到藥物的制劑研發過程當中。如今再聊PEG,則是源于接到很多客戶關于PEG抗體的咨詢,多半是很難找到合適的工具,借此機會,跟大家聊聊,希望對大家有所裨益。

 

關于PEG

聚乙二醇( PEG )是由重復的乙二醇(- ch2 - ch2 - o -)單元組成的合成聚合物。它毒性低,親水性強,在水溶液中有很大的排斥體積。聚乙二醇的共價結合( PEG 修飾)常被用來修飾各種蛋白質和藥物。聚乙二醇化有許多好處,包括降低免疫原性、提高生物藥效率和優化藥代動力學。

 

PEG的用途

PEG作為藥用輔料至今,已有上百年的歷史。由于PEG毒性小,水溶性好,長期以來倍受廣大藥劑工作者的青睞,廣泛的被應用于注射劑、局部用制劑、眼用制劑、口服及直腸用制劑等多種藥物劑型。PEG在水中具有較好的溶解性和良好的與藥物及其他溶劑的相溶性,相對分子質量小的液體PEG可以在制劑中作為溶劑使用,相對分子力量大的固體PEG可以與難溶性藥物制成固體分散體,以促進藥物的溶出。

 

20世紀70年代,Davis等報道用PEG修飾蛋白質,之后相繼開展了許多PEG與蛋白質和小分子藥物共價結合的研究。藥物的PEG修飾即PEG化,是將活化的PEG通過化學方法偶聯到蛋白、多肽、小分子有機藥物和脂質體上。

 

PEG 抗體及應用

由于 PEG 的無電荷性和生物相容性,它的免疫原性不強,使得 PEG 很難產生抗體。經過大量研發,abcam已經成功地產生了多種高質量 PEG RabMAb 一抗。

 

抗 PEG 抗體可用于監測藥物的藥代動力學,包括其分布、代謝和排泄等。

 

舉個例子:藥代動力學是對藥物在體內吸收、分布、代謝和排泄的時間過程進行的計算。為了檢查抗 PEG RabMAb 一抗在追蹤動物模型中聚乙二醇化抗原在代謝率方面的有效性,進行了以下實驗:

 

向大鼠腹膜內注射 100 μg 小鼠 IgG-PEG,用作抗原。

分別于注射后 0.5、1、2、4、10、24 和 48 小時采血。

提取抗血清并在 ELISA 測定中使用抗 PEG RabMAb 抗體檢測 IgG 濃度。

在包被有 5 μg/mL 抗 PEG RabMAb 抗體(ab51257, 克隆:PEG-B-47)的 96 孔板中,加入 PEG-HRP 和抗血清。

使用來自大鼠抗血清的定量 IgG 濃度以及由 IgG-PEG + HRP-PEG 競爭性測定產生的標準曲線(圖 1),可以確定注射的小鼠 IgG-PEG 在各個時間的濃度(圖 2 ) 。

 

如下所示,抗 PEG RabMAb 抗體可用于定量感興趣的靶標并研究系統內聚乙二醇化藥物或抗原的藥代動力學(圖 2 ) 。

 

圖 1:使用不同量的 IgG-PEG 和 PEG-HRP 以 1 : 30,000 的稀釋系數進行競爭性 ELISA 測定。

 

圖 2:使用 5 μg/mL 抗 PEG RabMAb 抗體(ab51257, 克隆:PEG-B-47)檢測各時間點(h)抗血清中小鼠 IgG-PEG 的濃度 (μg/mL)

 

另外,抗 PEG 抗體還可用于酶聯免疫吸附實驗( ELISA )、蛋白質印記( WB )和免疫組化( IHC )實驗中聚乙二醇化分子的質量控制。

 

再舉個例子:使用我們的抗 PEG 抗體檢測不同石蠟包埋組織樣本中的局部 PEG 化抗原。小鼠腹腔注射 100µg BSA-PEG 作為抗原。4小時后用抗 PEG RabMAb 一抗對心臟、腎臟、肝臟和脾臟組織進行染色。

 

▲免疫組化分析: 1a.小鼠心臟組織和 1b.小鼠腎臟組織注射100µg的BSA-PEG 4小時后,使用抗 PEG RabMAb 一抗 (ab51257) 檢測。

 

 

▲免疫組化分析: 1c. 小鼠肝臟組織和 1d. 小鼠脾臟組織注射 100µg BSA-PEG 4小時后,使用抗PEG RabMAb 一抗 (ab51257) 檢測。

 

 

▲免疫組化分析: 1e. 陰性對照-小鼠心臟組織和 1f. 陰性對照-小鼠腎臟組織使用抗 PEG RabMAb 一抗 (ab51257) 檢測。

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