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常用的免疫組織化學(xué)染色方法(下)

更新時(shí)間:2021-08-25 瀏覽次數(shù):2508

常用的免疫組化染色方法很多,有直接法和間接法。直接法是將酶或熒光素等標(biāo)記在第一抗體上,然后用該被標(biāo)記的第一抗體與組織細(xì)胞中的抗原結(jié)合,即可以顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果;


間接法是將標(biāo)記物標(biāo)記在第二抗體或第三抗體(復(fù)合物)上,其方法是先將特異性的第一抗體與組織細(xì)胞中相應(yīng)的抗原結(jié)合,再將被標(biāo)記上標(biāo)記物的第二抗體與第一抗體結(jié)合,最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。如果標(biāo)記物是標(biāo)記在第三抗體(復(fù)合物)上,則第二抗體與第一抗體結(jié)合后,再用被標(biāo)記上標(biāo)記物的第三抗體(復(fù)合物)與第二抗體結(jié)合,最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。


常用的EPOS一步法屬于直接法,EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB(S-P)法、SABC法、和CSA法等屬于間接法。相對(duì)來說直接法特異性高,敏感性低,而間接法則敏感性高,特異性低。


05
SABC 法



抗生物素蛋白鏈菌素-生物素復(fù)合物(streptavidin biotincomplex,SABC)法方法和ABC法相類似,不同之處是SABC法用抗生物素蛋白鏈菌素代替了ABC法ABC復(fù)合物中的卵白素獲得SABC復(fù)合物。由于抗生物素蛋白鏈菌素與生物素的親和力更高,而且SABC復(fù)合物不需在使用前配制,所以SABC法比ABC法更加敏感和簡單。




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06
LDP 法


酶標(biāo)聚合物法(labelled dextran polymer,LDP)法應(yīng)用了酶標(biāo)聚合物技術(shù),如EnVision檢測(cè)系統(tǒng),首先將辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記在葡聚糖聚合物上,然后再與第二抗體連接而形成EnVision二抗。


LDP法屬于二步法,特異性一抗和組織細(xì)胞抗原結(jié)合后,再用EnVision二抗與抗原抗體復(fù)合物中的一抗結(jié)合,最后通過EnVision二抗上的酶參與顯色反應(yīng)。


由于EnVision二抗中的聚合物結(jié)構(gòu)的*,可以連接更多的二抗,使每個(gè)多聚物有超過20個(gè)位點(diǎn)與第一抗體結(jié)合,聚合物上能標(biāo)記上的酶數(shù)量較多。因此在顯色時(shí)有充足的酶與顯色劑起反應(yīng)。


因此LDP法的敏感性高于ABC、LSAB等方法。此外,LDP法中的第二抗體沒有生物素的存在,不會(huì)出現(xiàn)ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內(nèi)源性生物素起交叉反應(yīng)的現(xiàn)象,因此LDP法的非特異性背景染色極低。




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07
EPOS 法


增強(qiáng)聚合物一步法(enhanced polymer one setp,EPOS)法也屬于酶標(biāo)聚合物法,和LDP法一樣,是利用酶標(biāo)聚合物技術(shù),將辣根過氧化物酶標(biāo)記在葡聚糖聚合物上,然后再與第一抗體連接而形成EPOS一抗。


EPOS法屬于直接法,直接用EPOS一抗特異性和組織細(xì)胞抗原結(jié)合后,一抗上的酶參與顯色反應(yīng)。由于EPOS一抗中的聚合物上能標(biāo)記上的酶數(shù)量較多,在顯色時(shí)有充足的酶與顯色劑起反應(yīng)。因此EPOS法雖然是直接法,但具有高敏感性。


此外,EPOS一抗沒有生物素的存在,不會(huì)出現(xiàn)ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內(nèi)源性生物素起交叉反應(yīng)的現(xiàn)象,背景清晰。但EPOS一抗種類較少,難以普及。



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08
CSA 法


催化信號(hào)放大(catlyzed signal amplificationCSA)法是應(yīng)用一種放大試劑生物素化酪胺,與抗生物素蛋白鏈菌素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(streptavidin biotin-HRP)連接,在過氧化物酶作用下形成大量的生物素沉積物,再加入抗生物素蛋白鏈菌素-過氧化物酶復(fù)合物后,過氧化物酶與生物素沉積物形成大量的過氧化物酶聚合,聚合的過氧化物酶與顯色劑起反應(yīng)。在第三步應(yīng)用了SABC法的SABC-HRP復(fù)合物,第五步應(yīng)用了LSAB法的SA-HRP復(fù)合物。


由于CSA法加入了催化信號(hào)放大試劑,使信號(hào)不斷放大,因此敏感性比EPOS一步法、EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB(S-P)法和SABC等方法高。特別適用于檢測(cè)較弱的組織抗原。



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以上就是后四種常用的免疫組織化學(xué)染色方法的簡介。如在實(shí)驗(yàn)中遇到困難,也可以選擇Leica全自動(dòng)免疫組化染色儀來協(xié)助您。



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