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速來圍觀!解讀2020年版無菌檢查法第二次征求意見稿
更新時(shí)間:2019-03-19 瀏覽次數(shù):2450
2020年版無菌檢查法第二次征求意見稿
解析
閱讀tips:紅色劃線部分為刪減內(nèi)容,藍(lán)色部分為增補(bǔ)修訂內(nèi)容。
1、 培養(yǎng)基可按以下處方制備,亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基或成品培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2~25℃、避光的環(huán)境,若保存于非密閉容器中,一般在3周內(nèi)使用;若保存于密閉容器中,一般可在一年內(nèi)使用若不即時(shí)使用,應(yīng)置于無菌密閉容器中,在 2~25℃、避光的環(huán)境下保存,并在經(jīng)驗(yàn)證的保存期內(nèi)使用。
解讀:密閉容器的理解,應(yīng)該是無菌屏障的概念。針對(duì)臨用新配的培養(yǎng)基,可使用非密閉容器(如傳統(tǒng)的三角錐形瓶);針對(duì)不即時(shí)使用的培養(yǎng)基,要求使用目前已經(jīng)慢慢普及的密封瓶(如藍(lán)蓋螺旋密封瓶)密閉保存,且有效期需要經(jīng)過企業(yè)自己的驗(yàn)證。對(duì)于滅菌F0≥8或者過度滅菌的培養(yǎng)基才有有效期驗(yàn)證的必要,對(duì)于115℃滅菌或者煮沸滅菌的培養(yǎng)基還是建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
2、0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基(用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查)的刪除.
解讀:這個(gè)培養(yǎng)基出現(xiàn)在硫酸鏈霉素和硫酸卡那霉素的各論中,采用的是直接接種法,且按照該法無法通過藥典的適用性檢查。故刪除。
3、接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上,20~25℃培養(yǎng)5~7天,或直到獲得豐富的孢子,加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫
解讀:明確黑曲霉培養(yǎng)的zui終目的-獲得豐富的孢子,可以理解如果生長良好,培養(yǎng)少于5天或多于7天都是允許的,這也是考慮在實(shí)際操作過程中,孢子的生長狀態(tài)受原始菌株、培養(yǎng)基、培養(yǎng)箱環(huán)境等的影響。例如小編在使用不同廠家培養(yǎng)基(進(jìn)口和國產(chǎn))培養(yǎng)黑曲霉時(shí),孢子的生長狀況是有很大的差別。
4、取每管適宜裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支,分別接種小于不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接種作為空白對(duì)照,培養(yǎng)不超過5天。逐日觀察結(jié)果。
解讀:在USP40中提到了面積/深度比的概念。在培養(yǎng)基靈敏度檢查培養(yǎng)基接種中,取消FTM和TSB每管體積的要求,因?yàn)榭紤]到了目前市售的不同廠家、規(guī)格的成品培養(yǎng)基的情況。取消逐日觀察,更符合實(shí)際操作。
5、水溶性供試液過濾前,一般應(yīng)先將少量的沖洗液過濾,以潤濕濾膜。
解析:預(yù)先潤洗膜可使膜首先達(dá)到吸附平衡,減少對(duì)供試液的吸附。提前潤洗濾膜,不要小瞧這步,有研究表明提前潤洗后殘留量可以相差3倍。
6、供試液經(jīng)薄膜過濾后,若需要用沖洗液沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量一般為100ml,且總沖洗量一般不超過500ml,zui高不得超過1000ml,以避免濾膜上的微生物受損傷。
解析:去除抑菌性的常用手段,首先選擇合適的中和劑,用了適合的中和劑可以提高方法的可重復(fù)性,USP40中的總沖洗量不超過500m。不過在《中國藥典分析檢測(cè)技術(shù)指南》總沖洗量還是控制在1000ml。